FARMACEUTYCZNY.PRZEGLĄD.NAUKOWY.04.2008.pdf

Nr 4 / 2008

Farmaceutyczny

Cena 24,50 zł

PISMO POD PATRONATEM WYDZIAŁU FARMACEUTYCZNEGO ŚLĄSKIEGO UNIWERSYTETU MEDYCZNEGO W KATOWICACH

Przegląd Naukowy

Farmaceutyczny

Index Copernicus 2,51

ROK V (IX)

Nr 4/2008 (38)

Uprzednio pod tytułem PORADNIK FARMACEUTY

ILOŚCIOWA OCENA MRNA TGF Β IZOFORM I ICH RECEPTORÓW

W ZDROWEJ TKANCE ROGÓWKI

INTERAKCJE LEKÓW PRZYJMOWANYCH Z POWODU CHORÓB JAMY

USTNEJ Z LEKAMI PRZYJMOWANYMI PRZEWLEKLE U PACJENTÓW

W WIEKU STARSZYM

MECHANIZM UPOŚLEDZENIA BIOSYNTEZY KOLAGENU

W PRZEBIEGU

DOŚWIADCZALNEGO STARZENIA FIBROBLASTÓW SKÓRY LUDZKIEJ

MOLEKULARNY MECHANIZM PRZECIWZAPALNEGO DZIAŁANIA

GLIKOKORTYKOSTEROIDÓW

OBSERWACJE NAD HEPATOPROTEKCYJNYM WPŁYWEM

EKSTRAKTU DNA Z CZERWIU PSZCZELEGO

OCENA CZĘSTOŚCI WYSTĘPOWANIA ALLELI GENU TNF

U CHORYCH NA CHŁONIAKI NIEZIARNICZE O WYSOKIM I NISKIM

STOPNIU ZŁOŚLIWOŚCI

OCENA CZYSTOŚCI MIKROBIOLOGICZNEJ ŚRODOWISKA ODDZIAŁU

URAZOWO-ORTOPEDYCZNEGO SZPITALA MIEJSKIEGO NR 1

W SOSNOWCU

OCENA CZYSTOŚCI MIKROBIOLOGICZNEJ ŚRODOWISKA BLOKU

OPERACYJNEGO SZPITALA MIEJSKIEGO NR 1 W SOSNOWCU

OCENA KOSZTÓW FARMAKOTERAPII CHORYCH NA CUKRZYCĘ

W WARUNKACH SZPITALA KLINICZNEGO

OCENA KOSZTÓW LECZENIA OSTRYCH ZESPOŁÓW WIEŃCOWYCH

(OZW)

OCENA TRENDÓW SPRZEDAŻY PREPARATÓW NIKOTYNOWEJ

TERAPII

ZASTĘPCZEJ (NTZ) W OGÓLNODOSTĘPNYCH APTEKACH NA

TERENIE WOJEWÓDZTWA ŚLĄSKIEGO I MAŁOPOLSKIEGO

OCENA WPŁYWU INDOLOLU,

ANALOGU STRUKTURALNEGO KARWEDILOLU NA AKTYWNOŚĆ

DYSMUTAZY PONADTLENKOWEJW KRWI LUDZKIEJ

ISSN 1425-5073

OCENA WPŁYWU METIONINY I SELENOMETIONINY NA OBRAZ

MORFOLOGICZNY NARZĄDÓW KRÓLIKA W DOŚWIADCZALNEJ 000

MIAŻDŻYCY

Farmaceutyczny

Przegląd Naukowy

Farmaceutyczny

ISSN 1425-5073

Farmaceutyczny

Index Copernicus 2,51

SPIS TREŚCI

Redaktor Naczelny:

Prof. dr hab. Krystyna Olczyk

ILOŚCIOWA OCENA MRNA TGF β IZOFORM

I ICH RECEPTORÓW W ZDROWEJ TKANCE ROGÓWKI 4

Adres redakcji:

41-200 Sosnowiec, ul. Jedności 8

Tel. 500 722 219

Fax. 032/364-11-34

Mail: fpn@kwiecinski.pl

INTERAKCJE LEKÓW PRZYJMOWANYCH

Z POWODU CHORÓB JAMY USTNEJ Z LEKAMI

PRZYJMOWANYMI PRZEWLEKLE

U PACJENTÓW W WIEKU STARSZYM 8

Konsultacyjna Rada Naukowa

Przewodniczący:

Prof. dr hab. Krystyna Olczyk

MECHANIZM UPOŚLEDZENIA BIOSYNTEZY KOLAGENU

W PRZEBIEGU DOŚWIADCZALNEGO STARZENIA

FIBROBLASTÓW SKÓRY LUDZKIEJ 11

Członkowie:

Prof. dr hab. Barbara Błońska – Fajfrowska

Prof. dr hab. Jerzy Brandys

Prof. dr hab. Elżbieta Brzezińska

Prof. dr hab. Ewa Buszman

Prof. dr hab. Zoﬁa Dzierżewicz

Prof. dr hab. Kazimierz Głowniak

Prof. dr hab. Edmund Grześkowiak

Prof. dr hab. Ewa Jagiełło-Wójtowicz

Prof. dr hab. Krzysztof Jędrzejko

Prof. dr hab. Krzysztof Jonderko

Prof. dr hab. Jan Kowalski

Prof. dr hab. Jerzy Kwapuliński

Prof. dr hab. Jan Pachecka

Prof. dr hab. Jerzy Pałka

Prof. dr hab. Janusz Pluta

Prof. dr hab. Janusz Solski

Prof. dr hab. Artur Stojko

Prof. dr hab. Maria Wardas

Prof. dr hab. marek Wesołowski

Prof. dr hab. Ludmiła Węglarz

Dr hab. Barbara Pilawa prof. nadzw. ŚUM

Dr hab. Zdzisława Kondera – Anasz

Dr hab. Urszula Mazurek

Dr hab. Andrzej Plewka

Dr hab. Krzysztof Solarz

Dr hab. Krystyna Trzepietowska – Stępień

MOLEKULARNY MECHANIZM PRZECIWZAPALNEGO

DZIAŁANIA GLIKOKORTYKOSTEROIDÓW 17

OBSERWACJE NAD HEPATOPROTEKCYJNYM WPŁYWEM

EKSTRAKTU DNA Z CZERWIU PSZCZELEG 21

OCENA CZĘSTOŚCI WYSTĘPOWANIA ALLELI GENU TNF

U CHORYCH NA CHŁONIAKI NIEZIARNICZE

O WYSOKIM I NISKIM STOPNIU ZŁOŚLIWOŚCI 24

OCENA CZYSTOŚCI MIKROBIOLOGICZNEJ ŚRODOWISKA

ODDZIAŁU URAZOWO-ORTOPEDYCZNEGO SZPITALA

MIEJSKIEGO NR 1 W SOSNOWCU 27

OCENA CZYSTOŚCI MIKROBIOLOGICZNEJ

ŚRODOWISKA BLOKU OPERACYJNEGO

SZPITALA MIEJSKIEGO NR 1 W SOSNOWCU 33

Sekretarz Naukowy:

Dr n. med. Robert D. Wojtyczka

Członkowie Kolegium Redakcyjnego:

Dr n. farm. Paweł Olczyk

Dr n. biol. Małgorzata Kępa

Mgr Kornelia Kuźnik-Trocha

OCENA KOSZTÓW FARMAKOTERAPII

CHORYCH NA CUKRZYCĘ

W WARUNKACH SZPITALA KLINICZNEGO 40

Wydawca:

Grupa Dr. A. R. Kwiecińskiego

OCENA KOSZTÓW LECZENIA OSTRYCH ZESPOŁÓW

WIEŃCOWYCH (OZW) 43

Adres Wydawcy:

Grupa dr. A. R. Kwiecińskiego

ul. Wiśniowa 25/2, 43-300 Bielsko-Biała,

tel. (0-33) 817-28-79 fax (0-33)817-36-31

OCENA TRENDÓW SPRZEDAŻY

PREPARATÓW NIKOTYNOWEJ TERAPIIZASTĘPCZEJ (NTZ)

W OGÓLNODOSTĘPNYCH APTEKACH

NA TERENIE WOJEWÓDZTWA ŚLĄSKIEGO

I MAŁOPOLSKIEGO 45

Prezes : dr n. med. Adam Kwieciński

Marketing Manager:

Mgr Katarzyna Pytlarczyk

kpytlarczyk@wizja.net.pl

Opracowanie graﬁczne:

Robert Cyganik

Skład:

Jerzy Partyka

OCENA WPŁYWU INDOLOLU,

ANALOGU STRUKTURALNEGO KARWEDILOLU

NA AKTYWNOŚĆ DYSMUTAZY PONADTLENKOWEJ

W KRWI LUDZKIEJ 48

Nakład: do 7 000 egz.

Wszystkie materiały opublikowane w piśmie objęte są ochroną Prawa autorskiego. Projekty chro-

nione są Ustawą o Prawie autorskim i pokrewnych prawach z 1994 r. (Dz. U. Nr 24, poz. 83). Redakcja

zastrzega sobie prawo dostosowania nadesłanych materiałów do potrzeb pisma. Przedruki możliwe

jedynie za zgodą wydawcy. Za treść materiałów reklamowych oraz listów od czytelników redakcja

nie odpowiada.

OCENA WPŁYWU METIONINY I SELENOMETIONINY

NA OBRAZ MORFOLOGICZNY NARZĄDÓW KRÓLIKA

W DOŚWIADCZALNEJ MIAŻDŻYCY 51

Przegląd Naukowy

Uprzednio pod tytułem PORADNIK FARMACEUTY

PISMO POD PATRONATEM WYDZIAŁU FARMACEUTYCZNEGO ŚLĄSKIEGO UNIWERSYTETU MEDYCZNEGO W KATOWICACH

ILOŚCIOWA OCENA mRNA TGF β IZOFORM I ICH RECEPTORÓW

W ZDROWEJ TKANCE ROGÓWKI

QUANTITATIVE ANALYSIS OF TGF β ISOFORMS mRNA AND ITS RECEPTORS IN THE

NORMAL CORNEAL TISSUE

Dr n. farm. Barbara Strzałka 1 , Doc. dr hab. n. med. Urszula Mazurek 1 , Dr n. med. Mariola Dorecka 2 ,

Lek. med. Agnieszka Stanik-Walentek 2 , Prof. dr hab. n. med. Wanda Romaniuk 2

1 Katedra i Zakład Biologii Molekularnej Wydziału Farmaceutycznego i Oddziału Medycyny Laboratoryjnej,

Śląski Uniwersytet Medyczny

2 Katedra i Oddział Kliniczny Chorób Oczu, Śląski Uniwersytet Medyczny

Kierownik 1 Katedra i Zakład Biologii Molekularnej: Doc. dr hab. n. med. Urszula Mazurek

Kierownik 2 Katedra i Oddział Kliniczny Chorób Oczu: Prof. dr hab. n. med. Wanda Romaniuk

Streszczenie

Rodzina transformujących czynników wzrostu ß - TGFß

to plejotropowe cytokiny odgrywające istotną rolę

w różnych procesach biologicznych takich jak wzrost,

różnicowanie oraz apoptoza komórek. Celem pracy

było wyznaczenie proﬁlu ekspresji genów TGFß1, -ß2,

-ß3 i ich receptorów TßRI, TßRII, TßRIII oraz ocena re-

lacji ilościowych pomiędzy analizowanymi transkryp-

tami w zdrowej rogówce. Rąbek rogówki pozyskano od

18 dawców, w wieku 19 - 53 lat. Liczbę kopii mRNA

badanych genów wyznaczono techniką QRT- PCR przy

użyciu detektora sekwencji Opticon™ DNA Engine Se-

quence Detector.

Izoformy TGFβ1, -2, -3 i ich receptory TßRI, TßRII,

TßRIII wykazują różną ekspresję w rąbku rogówki,

co sugeruje, że mogą one pełnić specyﬁczne funkcje

w zdrowej rogówce.

Słowa kluczowe: rogówka, izoformy TGFβ, receptory

TGFβ, RT-PCR

Summmary:

Transforming growth factor ß - TGFß a family of mul-

tifunctional cytokines, has wide biological actions inc-

luding growth, differentiation, and cell apoptosis. The

aim of the study was to determine the gene expression

proﬁle of TGFß1, -2, -3, and their receptors TßRI,

TßRII, TßRIII in order to evaluate quantitative relations

between examined transcripts in a healthy cornea. The

study was carried out in 18 donors aged 19 - 63. To

evaluate studied gene expression mRNA was extracted

from corneal limbus and the number of mRNA copies

were assessed by QRT-PCR using Opticon™ DNA En-

gine Sequence Detector. We found different expression

of the TGFβ1, -2, -3 isoforms and TßRI, TßRII, TßRIII

receptors in the human corneal limbus what suggests

that each of them may play a speciﬁc role in healthy

cornea.

Keywords: cornea, TGFß isoforms, TGFß receptors,

RT-PCR

Wstęp

ny efekt biologiczny na tkanki, jednak in vivo charaktery-

zują się one zasadniczo różnym stopniem ekspresji i pełnią

odmienne funkcje. Ich aktywność biologiczna jest uzależ-

niona od relacji ilościowych pomiędzy poszczególnymi izo-

formami i ich receptorami [3, 5, 8].

Celem pracy było wyznaczenie proﬁlu ekspresji genów

kodujących izoformy TGFβ1, -β2, -β3 i ich receptory TβRI,

TβRII, TβRIII oraz ocena relacji ilościowych pomiędzy ana-

lizowanymi transkryptami w zdrowej ludzkiej rogówce.

Rogówka jest tkanką beznaczyniową, gładką, przezroczy-

stą, lśniącą, która razem z ﬁlmem łzowym stanowi pierwszy

ośrodek skupiający promienie świetlne [1, 2]. Szereg proce-

sów biologicznych takich jak wzrost, różnicowanie, prolife-

racja czy apoptoza przebiegających w komórkach rogówki

ściśle wiąże się z różnorodnymi cytokinami, do których

należą m. in. czynniki wzrostu [3, 4]. Rodzina transformu-

jących czynników wzrostu β - TGFβ obejmuje 5 izoform

kodowanych przez różne geny, z których TGFβ1, TGFβ2,

TGFβ3 występują u ssaków [5, 6]. Cytokiny te stymulują

neowascularyzację, biorą udział w powstawaniu składni-

ków macierzy pozakomórkowej, uczestniczą w procesach

bliznowacenia i gojeniu ran [3, 4, 7, 8].

W warunkach in vitro izoformy TGFβ wywierają zbliżo-

Materiał i metody

Materiałem do badań był rąbek rogówki pozyskany od

18 dawców (9 kobiet i 9 mężczyzn), w wieku 19 - 53 lat.

Dawcy rogówki celem ketatoplastyki drążącej byli włączani

do badania wg kryteriów określonych przez Amerykańskie

4 Farmaceutyczny

ISSN 1425-5073

Przegląd Naukowy

Nr 4 / 2008

Stowarzyszenie Banków Tkanek Oka (EBAA).

Rogówkę zmarłego dawcy pobierano do ce-

lów transplantacyjnych do 2 godzin od zgonu.

Uzyskany po wytrepanowaniu części tkanki

rąbek rogówki był natychmiast umieszczany

w odczynniku EUSOL C (Alchimia, Padova,

Włochy) i przechowywany do czasu dalszej

analizy w -70°C. Na przeprowadzenie badań

uzyskano zgodę Komisji Bioetycznej przy

Śląskiej Akademii Medycznej w Katowicach

(NN-6501-146/06).

Ekstrakcja kwasu rybonukleino-

wego

Ekstrakcję RNA z rąbka rogówki przepro-

wadzono przy użyciu zestawu odczynników

do izolacji całkowitego RNA (Total RNA Prep

Plus Kit, A&A Biotechnology, Gdańsk, Polska)

zgodnie z zaleceniami producenta. Stężenie

wyizolowanego RNA oraz stopień jego czysto-

ści był oceniany na podstawie pomiarów spek-

trofotometrycznych dokonanych na kalkulato-

rze DNA/RNA Gene-Quant Pro (Amersham

Pharmacia Biotech AB).

Rysunek 1. Przykładowy elektroforegram przedstawiający rozdział pro-

duktów reakcji QRT PCR w 6% żelu poliakrylamidowym barwionym so-

lami srebra. Ścieżka 1 – marker wielkości – plazmid pBR 322/Hae III,

ścieżka 2 – amplimer TGFß1 (152 pz), ścieżki 3 i 4 – amplimer TßRI

(201 pz), ścieżki 5 i 6 – amplimer TßRII (139 pz), ścieżki 7 i 8 – amplimer

TßRIII (173pz).

Reakcja QRT-PCR dla mRNA

izoform TGF β i ich receptorów

Aktywność transkrypcyjną badanych genów oceniano

na podstawie analizy kinetyki reakcji RT-PCR z zastoso-

waniem zestawu odczynników SYBR Green Quantitect

RT-PCR Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA) oraz detektora

sekwencji Opticon™ DNA Engine Sequence Detector (MJ

Research Inc., Watertown, MA, USA). Odwrotną transkryp-

cję (RT) prowadzono w temperaturze 50°C przez 30 minut,

natomiast ampliﬁkację prowadzono w warunkach tempera-

turowych: 95°C przez 15 minut; 50 dwustopniowych cykli:

95°C przez 30 sekund i 60°C przez 60 sekund oraz końco-

we wydłużanie 72°C przez 10 minut. Każda reakcja prze-

prowadzona była w trzech powtórzeniach. Zastosowano

następujące sekwencje starterów, zaprojektowane z wyko-

rzystaniem programu Primer Express™ v.2.0 software (PE

Applied Biosystems, Inc., Foster, CA, USA):

TGFβ1 (Gen Bank accession no. X02812) 5’TGAAC-

CGGCCTTTCCTGCTTCTCATG3’ (starter sensowny),

5’GCGGAAGTCAATGTACAGCTGCCGC3’ (starter an-

tysensowny);

TGFβ2 (Gen Bank accession no. NM_003238), 5’TAC-

TACGCCAAGGAGGTTTACAAA3’ (starter sensowny), 5’T-

TGTTCAGGCACTCTGGCTTT3’ (starter antysensowny);

TGFβ3 (Gen Bank accession no. NM_003239) 5’CTG-

GATTGTGGTTCCATGCA3’ (starter sensowny), 5’TCCC-

CGAATGCCTCACAT3’ (starter antysensowny);

TβRI (Gen Bank accession no. AF054592) 5’ACTGG-

CAGCTGTCATTGCTGGACCAG3’ (starter sensowny),

5’CTGAGCCAGAACCTGACGTTGTCATATCA3’ (star-

ter antysensowny);

TβRII (Gen Bank accession no. M85079) 5’GGCTCA-

ACCACCAGGGCATCCAGAT3’ (starter sensowny),

5’CTCCCCGAGAGCCTGTCCAGATGCT3’(starter

antysensowny);

TβRIII (Gen Bank accession no. L07594) 5’ACCGT-

GATGGGCATTGCGTTTGCA3’ (starter sensowny),

5’GTGCTCTGCGTGCTGCCGATGCTGT3’(starter anty-

sensowny).

Dla wszystkich prób badanych była wykonywana rów-

nież reakcja QRT-PCR dla mRNA genu β-aktyny, mająca

potwierdzić natywność ekstraktu RNA w przypadku ewen-

tualnego braku/inhibicji ekspresji badanych genów. Specy-

ﬁczność reakcji RT-PCR potwierdzono techniką elektrofore-

zy w 6% żelu poliakrylamidowym barwionym solami srebra

(Rysunek 1.) oraz wyznaczeniem temperatury topnienia

produktów PCR (Rysunek 2A, Rysunek 2B) .

Analiza statystyczna

Wyniki badań poddano analizie statystycznej z wykorzy-

staniem licencjonowanej wersji programu Statistica v.7.1 PL

dla poziomu istotności p<0,05. Istnienie różnic weryﬁkowa-

no za pomocą testu ANOVA Kruskala – Wallisa, a charakter

poszczególnych zależności ustalano stosując test post-hoc

oparty o średnie rangi.

Wyniki

Miarą aktywności transkrypcyjnej genów kodujących izo-

formy TGFβ i ich receptory była liczba cząsteczek mRNA

przeliczona na 1 μg całkowitego RNA. W ludzkiej rogów-

ce wykazano ekspresję wszystkich izoform TGFβ(TGFβ1-

ISSN 1425-5073

Farmaceutyczny

Przegląd Naukowy

Plik z chomika:

Inne pliki z tego folderu:

Inne foldery tego chomika: