izolacja_dna_zcebuli.pdf

Jarek Bryk, Joanna Lilpop, Anna Lorenc, Rafał Parol

Biologia molekularna od kuchni

izolacja DNA z cebuli

BIOLOGIA MOLEKULARNA W KUCHNI : IZOLACJA DNA Z CEBULI

MATERIAŁY

PRZEPIS DOŚWIADCZENIA

• Jedna świeża cebula (lub np. 100g mrożonego zielonego

groszku, pomidor, brzoskwinia)

• 10ml nie skoncentrowanego płynu do naczyń (2 łyżki

stołowe)

• 4g soli kuchennej (łyżeczka do herbaty)

• 90ml wody (trochę mniej niż pół szklanki)

• 10ml 95% alkoholu z zamrażalnika (wstawić do zamrażalnika

w plastikowym naczyniu na dzień przed eksperymentem)

• Filtr do kawy

• Nóż + deseczka do krojenia cebuli

• Pojemnik na ok. 350ml na „zupę warzywną”

• Większy pojemnik pełniący rolę łaźni wodnej

• Mały mikser (ostrze tnące / rozdrabniające)

• Duży lejek

• Probówka do strącania DNA (np. kieliszek)

• Coś do wyciągnięcia DNA (np. patyczek szaszłykowy)

• Opcjonalnie szczypta soli do zmiękczania mięsa lub odrobina

świeżego soku z ananasa (nie z puszki!)

Rozpuścić całą sól kuchenną w wodzie.

Wlać roztwór soli do naczynia z płynem do mycia

naczyń i delikatnie wymieszać (żeby się nie

spienił!).

Włożyć pokrojone kawałki do pojemnika

i zalać roztworem soli kuchennej i płynu do

mycia naczyń.

Obrać cebulę i bardzo drobno pokroić w kostkę (im

drobniej, tym lepiej – kawałki o boku około 0,5 cm są

świetne, ale z nieco większymi też działa).

Jeśli izolujemy DNA z mrożonego groszku, wystarczy go

rozgnieść widelcem.

IPojemnik z „zupą cebulową” inkubować w

temperaturze około 60 stopni (np. w garnku

z gorącą wodą) przez 10-15 minut (nie

dłużej!).

Następnie oziębić – np. włożyć na

chwilę do pojemnika z zimną wodą

lub lodem.

60 o C

zimna

woda

BIOLOGIA MOLEKULARNA W KUCHNI : IZOLACJA DNA Z CEBULI

Całą mieszaninę zmiksować przez

maksymalnie 3 sekundy.

Przeiltrować mieszaninę przez iltr do kawy do

niedużego naczynia (np. plastikowego kubka).

Uważać, żeby piana z detergentu w mieszaninie

nie dostała się do przesączu!

Do przesączu w kubku dodać szczyptę soli do

zmiękczania mięsa lub 5 kropli świeżego soku

z ananasa. Pozostawić na 5 minut.

Przelać przesącz z kubka do kilku

probówek. Zwykle z 1 cebuli powinniśmy

otrzymać min. 50ml przesączu.

Po chwili DNA będzie wytrącać

się do warstwy alkoholowej

w postaci cienkich, długich,

galaretowatych nitek z

przyczepionymi bąbelkami

powietrza. Można je spokojnie

nawijać na patyczek i

wyjmować z alkoholu.

Bardzo ostrożnie i powoli (najlepiej po

ściance) nalać do probówki z przesączem

taką samą objętość zimnego etanolu, ile

jest przesączu, tak, aby alkohol utworzył

nad nim warstwę.

UWAGA! W razie braku czasu kroki 6 i 9 można pominąć :)

.....................................................................................................................

OMÓWIENIE DOŚWIADCZENIA

Roztwór soli kuchennej i płynu do zmywania naczyń (a tak naprawdę detergentu) powoduje

rozpad błon komórkowych, otoczki jądrowej, błon organelli i innych błon wewnątrzkomórkowych.

Inkubacja w temperaturze 60 stopni przyspiesza proces rozpadu błon oraz denaturuje DNAzy,

które mogłyby szybko strawić DNA. Czas inkubacji jest bardzo istotny – za długa inkubacja

doprowadzi do denaturacji DNA!

Miksowanie prowadzi do mechanicznego zniszczenia ścian komórkowych i wylania się zawartości

komórek do mieszaniny. Czas miksowania również ma znaczenie, gdyż za długie miksowanie

zniszczy DNA (a także bardzo spieni mieszaninę!).

Sól do zmiękczania mięsa oraz świeży sok z ananasa zawierają proteazy, które trawią białka

znajdujące się w przeiltrowanej mieszaninie. Stężony etanol powoduje wytrącenie DNA

z roztworu wodnego.

.................................................................................................................................

Szkoła Festiwalu Nauki | ul. Trojdena 4 | 02-109 Warszawa

tel. (22) 659-55-33 wew. 610 | fax (22) 668-52-88 | sfn@iimcb.gov.pl | www.sfn.edu.pl

Plik z chomika:

Inne pliki z tego folderu:

Inne foldery tego chomika: