Paulina Krzemińska 19.10.2011 r.
Opis doświadczenia 3:Otrzymywanie i badanie hydrolizatu RNA z drożdży.
1. Izolacja hydrolizatu RNA z drożdży:
2. Przeprowadzone doświadczenia:
Przed przystąpieniem do analizy jakościowej otrzymanego hydrolizatu, przygotowałam 0,1-molowy roztwór RNA poprzez rozpuszczenie zawartości eppendorfa, w którym było więcej hydrolizatu, w 10 ml H2O. Osad całkowicie się rozpuścił i tego roztworu używałam do przeprowadzenia następujących reakcji:
Dodany odczynnik
RNA
DNA
HCl/obserwacje
Brak zmian
NaOH/obserwacje
Wnioski
Na podstawie tego doświadczenia można napisać, iż DNA i RNA rozpuszczają się w kwasie i w zasadzie. Nie jest to prawda, ponieważ kwasy nukleinowe rozpuszczają się tylko w zasadach. Zafałszowanie wyników doświadczenia mogło być spowodowane za małym dodatkiem kwasu lub nieczystością odczynników z których korzystałam.
Et-OH/obserwacje
Zmętnienie
Kwasy nukleinowe nie rozpuszczają się w alkoholach. Jest to spowodowane zmianą polarności, jaką niesie ze sobą dodatek alkoholu, przez co zaburza strukturę kwasów.
ryboza
galaktoza
H2O
Odczynnik orcynolowy + ogrzewanie/ obserwacje
Ciemnozielony roztwór
Jasnozielony roztwór
Brak zmian / żółty roztwór
Reakcja orcynolowa ma na celu wykrycie cukru – pentozy. Według literatury deoksyryboza z oryną i FeCl3 daje dziesięciokrotnie słabszy kompleks podczas tej reakcji, niż ryboza, natomiast galaktoza jest heksozą. Na podstawie tych informacji można wnioskować, iż przeprowadzone przeze mnie doświadczenie przebiegło w pożądany sposób.
H2O
HCl + floroglucyna + ogrzewanie/ obserwacje
Czerwono – brązowy roztwór
Brudnozielony roztwór
Bardzo ciemno – brązowy roztwór
Ta reakcja mana celu wykrycie również pentozy, ponieważ wiadomo, iż w obecności floroglucyny te cukry barwią roztwór na czerwono. Przeprowadzone przeze mnie doświadczenia niestety nie potwierdziły obecności pentozy w DNA (a powinno), oraz co dziwne, wynik galaktozy wyszedł w sposób, jakby była ona właśnie pięciowęglowym cukrem, a nim nie jest. Czerwono-brązowe lub brązowe zabarwienie potraktowałam jako pozytywny wynik próby ze względu na wiek odczynników.
2’-deoksyryboza
Odczynnik difenyloaminowy + ogrzewanie / obserwacje
Brak zabarwienia
Granatowy roztwór
Odczynnik difenyloaminowy pozwala na odróżnienia DNA od RNA, ponieważ tylko z deoksyrybozą daje granatowe zabarwienie. Moje doświadczenie potwierdziło całkowicie domyślny przebieg reakcji.
Do tej reakcji przygotowałam osobny roztwór poprzez rozpuszczenie mniejszej części uzyskanego na początku hydrolizatu RNA z 2 ml 0,1-molowej NaOH. Jest to 0,2%-owy roztwór RNA.
Do 0,2%-owego roztworu RNA dodałam 2 ml 1-molowego H2SO4 i ogrzewałam przez około 45 minut. Otrzymałam RNA po hydrolizie kwasowej.
...
pu_lina