Wydział: IS2
Kierunek: Biotechnologia
Wyznaczanie optymalnego stężenia chlorku 2,3,4-trójfenylotetrazolowego podczas oznaczania aktywności dehydrogenaz za pomocą testu TTC
Wykonały:
Dorota Olszewska
Bania Dominika
Czaja Sabina
Wykonanie, obliczenia i wnioski:
Wyznaczanie optymalnego stężenia chlorku 2,3,4-trójfenylotetrazolowego podczas oznaczania aktywności dehydrogenaz za pomocą testu TTC.
Do oznaczonych probówek wirowych wprowadziłyśmy następujące objętość [ml] reagentów:
Reagenty
Probówki (każda próbę robimy podwójnie)
1
2
3
4
5
6
7
8
Roztwór Na2SO3
H20
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,3
0,2
-
Roztwór TTC
0,1
0,4
Osad czynny
¨Po wprowadzeniu reagentów zawartość probówek wymieszałyśmy, a następnie nasze probówki odłożyłyśmy do inkubacji w ciemności w temperaturze pokojowej na 30 min. Po zakończeniu inkubacji próbki odwirowałyśmy (probówki wirowały się do 3000 obrotów na minutę), następnie odrzuciłyśmy supernatant, a następnie dla przerwania reakcji enzymatycznych i ekstrakcji TF wprowadziłyśmy do próbówek po 8 ml alkoholu metylowego w takiej samej kolejności i zachowując podobne tempo jak przy wprowadzaniu roztworu TTC. Próbki energicznie wytrząsnęłyśmy i ponownie odstawiłyśmy do wirowania. Na samym końcu oznaczyłyśmy ekstynkcję cieczy nadosadowej przy długości fali 485 nm.
probówki
ekstynkcja
średnia ekstynkcja
stężenie TTC w próbce [%]
0,393
0,572
0,02%
0,752
0,543
0,674
0,04%
0,806
0,979
0,974
0,06%
0,969
0,635
0,841
0,08%
1,047
1,042
1,045
0,1%
1,048
1,054
...
peroni69