Kwasy nukleinowe - REAKCJE NA WYKRYWANIE.docx

Kwasy nukleinowe

Kwasy nukleinowe są wielkocząstkowymi związkami, zbudowanymi z mniejszych jednostek zwanych nukleotydami, które dają się hydrolitycznie rozłożyć na kwas ortofosforowy(V) i nukleozydy, a e ostatnie na cukier (pentozę) oraz zasady purynowe i pirymidy-nowe. Zależnie od rodzaju reszty cukrowej rozróżniamy:
1. kwasy rybonukleinowe (RNA), zawierające resztę rybozy
2. kwasy deokrytybonukleinowe (DNA), zawierające resztę 2-deoksyrybozy.
Nukleozydy – dą N-glikozydami zasad azotywych (pirymidynowych i purynowych) z pentozą (rybozą względnie deoksyrybozą).
Nukleotydy – są estrami kwasu ortofosforowego(V) i nukleozydów.

01 - Hydroliza kwasów nukleinowych
Do próbówki wprowadzić 5 cm3 roztworu kwasu nukleinowego (RNA i DNA) i dodać taką samą objętość H2SO4. Zawartość pro-bówki ogrzewać w łaźni wodnej przez 45 minut. Otrzymany hydrolizat zachować do dalszych doświadczeń.
02 - Wykrywanie pentoz
a. Reakcja Biala – Do czterech probówek wprowadzić kolejno po 1 cm3 roztworów: rybozy, deoksyrybozy, hydrolizatu RNA, hy-drolizatu DNA. Do każdej probówki dodać 5 cm3 odczynnika Biala i ogrzewać, utrzymując we wrzeniu przez kilkanaście sekund. W każdej probówce pojawia się zielone zabarwienie.
b. Reakcja Dischego – Do czterech probówek wprowadzić kolejno roztwory po 1 cm3 roztworów: rybozy, deoksyrybozy, hydroliza-tu RNA, hydrolizatu DNA. Do każdej probówki dodać 2 cm3 odczynnika Dischego i ogrzewać we wrzącej łaźni przez około 10 min. W obecności deoksyrybozy występuje fiołkowe zabarwienie.
03 - Wykrywanie zasad purynowych i pirymidynowych
a. Wytrącanie zasad purynowych – Do 1 cm3 wrzącego hydrolizatu dodać rozcieńczonego kwasu octowego do słabo kwaśnego od-czynu (sprawdzić za pomocą papierka uniwersalnego). Ogrzać do wrzenia, a następnie wprowadzić parę kropli 10%-owego CuSO4 oraz ostrożnie kroplami nasyconego roztworu NaHSO3. Wytrąca się żółty osad.
b. Wytrącanie zasady purynowych i pirymidynowych – W pięciu probówkach umieścić kolejno kryształek: adeniny, guaniny, cyto-zyny, uracylu, tyminy. Do każdej probówki wprowadzić po 0,1 cm3 roztworu amoniaku i po całkowitym rozpuszczeniu związku do-dać 0, 5 cm3 roztworu azotany(V) srebra. Próbki wytrąconych, krystalicznych osadów obejrzeć pod mikroskopem. Następnie do dwóch probówek wprowadzić oddzielnie po 1 cm3 hydrolizatu RNA oraz DNA. Do każdej z nich dodać po 1 cm3 roztworu azota-nu(V) srebra. Wytrącone osady obejrzeć pod mikroskopem i porównać z kryształami czystych zasad.
04 - Wykrywanie kwasu ortofosforowego(V)
Do dwóch probówek wprowadzić oddzielnie po 1 cm3 hydrolizatu RNA i DNA. Do każdej probówki dodać 3 cm3 roztworu mo-libdenianu amonu i ogrzać do wrzenia. Pojawia się zółte zabarwienie, a następnie osad fosforomolibdenianu amonu. Po oziębieniu probówek dodać do każdej 1 cm3 reduktora metalowego. Tworzy się błękit molibdenowy.