Sprawozdanie 1- 15.02.2012.doc

Patrycja Kąkol                                                                                                                                                             15.02.2012
nr indeksu: 186504
Mikrobiologia
grupa: Środa, godz. 730-900
 

ĆWICZENIE 1
Morfologia komórki i kolonii.
Barwienie pozytywne proste i barwienie negatywne.

              Celem ćwiczenia, jest określenie morfologii komórki metodą barwienia pozytywnego prostego oraz barwienia negatywnego. Morfologia pozwala na zidentyfikowanie drobnoustrojów i przypisanie do gatunku, odpowiadającego cechom wyglądu danej komórki.
Wyróżniamy 3 formy komórek:
•formy kuliste – ziarniaki (dwoinki, pakietowce, paciorkowce, gronkowce);
•formy cylindryczne – pałeczki (maczugowce, laseczki);
•formy skręcone – śrubowce, krętki, przecinkowce, promieniowce.

              Bakterie są słabo widoczne pod mikroskopem, co skutkuje w trudności określenia ich morfologii. W celu ich lepszego uwidocznienia stosuje się różne techniki barwienia. Wyróżniamy barwienie proste (gdy używamy jednego barwnika) oraz złożone (gdy używamy przynajmniej dwóch barwników). Inne kryterium barwienia dzieli je na barwienie pozytywne (gdy barwi się obiekt badań) oraz barwienie negatywne (gdy barwi się jedynie tło). Barwienie wykonuje się na preparatach przyżyciowych lub utrwalonych.
W barwieniu pozytywnym stosuje się zwykle barwniki zasadowe, czyli takie, które w roztworach wodnych mają ładunek dodatni. Często stosowanymi barwnikami zasadowymi są między innymi : błękit metylenowy, fiolet krystaliczny, fuksyna karbolowa i safranina. Natomiast w barwieniu negatywnym, w którym barwi się nie obiekt lecz tło używa się barwników kwaśnych o ładunku ujemnym, których jony są odpychane od bakteryjnych ścian komórkowych. Są to barwniki o charakterze tuszu, np. tusz chiński lub nigrozyna. Barwienie negatywne stosuje się wówczas, kiedy chcemy lepiej uwidocznić bakterie nie przyjmujące barwników lub w celu uwidocznienia otoczek bakteryjnych.

              Komórka bakteryjna po dostaniu się na powierzchnię zestalonej pożywki, zaczyna się dzielić i po określonym czasie wytwarza bardzo liczne zgrupowania komórek zwane kolonią, które jest widoczne gołym okiem. Wygląd zewnętrzny kolonii powierzchniowej, czyli jej morfologia, jest charakterystyczna dla danego rodzaju mikroorganizmu, dlatego jest pomocny w jego identyfikacji.
Niektóre gatunki bakterii tworzą dwa typy kolonii: S i R. Kolonie typu S mają gładką powierzchnię, a kolonie R szorstką. Jest to związane z różnicami w budowie błony zewnętrznej pokrywającej ścianę komórkową tych bakterii.

Zadanie 1.
Morfologia komórki – wykonanie barwienia prostego błękitem metylenowym.

Opis: Aby zacząć barwienie, należało przygotować najpierw preparat. W tym celu odtłuszczono szkiełko, następnie wykonać rozmaz pobranej zawiesiny bakterii, w tym przypadku były to bakterie Bacillus cereus. Po wyschnięciu preparatu utrwalono go termicznie nad płomieniem palnika.
Tak przygotowany preparat zalano błękitem metylenowym na 1,5 minuty, po czym spłukano wodą destylowaną i osuszono ręcznikiem papierowym, delikatnie, tak aby nie zetrzeć utrwalonego preparatu ze szkiełka.
Następnie rozprowadzono na preparacie olejek impresyjny, ponieważ użyto do obserwacji obiektywu 100x.

Obserwacje:
 

Wnioski: Obserwowane bakterie, Bacillus cereus, są formą bakterii cylindrycznych, o wydłużonym kształcie, są to laseczki. Na obserwowanym preparacie daje się zauważyć tworzone przez nie łańcuchy. Mogą także tworzyć przetrwalniki.

Zadanie 2.
Morfologia komórki – wykonanie barwienia negatywnego.

Opis: Jak w zadaniu pierwszym przygotowano preparat, tym razem z  Saricina lutea. Tyle, że nie utrwalamy go nad palnikiem. Obok zawiesiny bakterii  położono kroplę nigrozyny i drugim szkiełkiem zmieszano obie krople.
Preparat pozostawiono do wyschnięcia, po czym oglądano pod imersją, pod obiektywem 100x. Bakterie barwione tą metodą pozostały żywe. Był to preparat przyżyciowy.

Obserwacje:

Wnioski: Obserwowane bakterie, Sarcina lutea, są formą bakterii kulistych. Pod mikroskopem nie był widoczny ich dokładny kształt, ale Sarcina lutea to pakietowce, skupiska bakterii układające się w formę sześcianów.