Ćwiczenia z mikrobiologii dla biotechnologii.pdf

Ćwiczenia z Mikrobiologii dla Biotechnologii

Opracowane przez dr Dorotę Dziadkowiec na podstawie ćwiczeń z Mikrobiologii Ogólnej

dla studentów II roku Biologii ułożonych w połowie lat 90-tych przez Elżbietę Panek przy

współpracy dr Elżbiety Morzejko.

Instrukcje do ćwiczeń napisały dr Dorota Dziadkowiec oraz dr Anna Krasowska .

PLAN ĆWICZEŃ Z MIKROBIOLOGII OGÓLNEJ

dla II roku Biotechnologii

Ćwiczenie 1 . Hodowla mikroorganizmów in vitro -

podłoża mikrobiologiczne i sterylizacja.

Hodowla mikroorganizmów in vitro - techniki posiewu.

Ćwiczenie 2. Technika mikroskopowania - metoda Grama.

ształt, wielkość i ruch drobnoustrojów.

Sprawozdanie

Ćwiczenie 3. Barwienia złożone (metoda negatywowo-pozytywowa).

Hodowla mikroorganizmów in vitro -

Izolacja czystych hodowli. Określanie liczby bakterii w hodowli.

Sprawozdanie.

Ćwiczenie 4. Identyfikacja bakterii w mieszanej hodowli – praktyczne zaliczenie części

ćwiczeń dotyczącej hodowli i barwień.

Kolokwium.

Ćwiczenie 5. Metabolizm bakterii:

Rozkład związków wielkocząsteczkowych. Wiązanie N 2 .

Rozkład związków drobnocząsteczkowych.

Ćwiczenie 6 . Wpływ czynników fizycznych i chemicznych środowiska na bakterie.

Ćwiczenie 7. Bakteriofagi.

Kolokwium.

Ćwiczenie 8. Odczyt wyników i zaliczenie ćwiczeń.

Zasady BHP w pracowni mikrobiologicznej:

• odpowiedni ubiór:

zapięte fartuchy bawełniane , spięte włosy, uwaga na lakier do paznokci przy pracy z

palnikami, nie wolno używać tuszu do rzęs, gdy pracuje się z mikroskopem

• zachowanie w pracowni:

każdy pracuje samodzielnie, na siedząco , nawet w przypadku podziału zadania na zespoły;

uważamy na palniki gazowe – proszę się nie nachylać nad nimi i nie podawać przedmiotów w

poprzek stołów laboratoryjnych; nie wolno chodzić po pracowni trzymając w ręce zakażone

ezy, pipety itp.; przy pracy z drobnoustrojami uważać należy na potencjalnie zakażone ręce

lub sprzęty np. długopis – proszę nie brać ich do ust, ani nie pocierać skóry;

po zakończonych ćwiczeniach koniecznie należy umyć ręce

w przypadku pytań, niejasności, czy problemów proszę zwracać się do prowadzącego

• wymagane wyposażenie:

długopis, ołówek, marker do pisania po szkle, zeszyt czysty lub w kratkę, zapałki lub zapalniczka

O wszelkich wypadkach należy bezzwłocznie powiadomić prowadzącego!!!

Ćwiczenie 1 . Hodowla mikroorganizmów in vitro -

podłoża mikrobiologiczne i sterylizacja.

Przygotowujemy płytki Petriego z agarem odżywczym (AO)

a) z kolbki z rozpuszczoną sterylną pożywką wylewamy porcje po około 20 ml do jałowych

płytek Petriego,

b) pozostawiamy płytki do zastygnięcia po czym na powierzchni płytki z pożywką każda

osoba nanosi odcisk palca (dwie płytki na grupę), płytki te zanosimy do cieplarki i

inkubujemy w 37 o C przez 24 godziny, a resztę płytek przechowujemy w chłodni do

następnych ćwiczeń.

Hodowla mikroorganizmów in vitro - techniki posiewu.

Izolacja czystych hodowli.

1. Techniki posiewów ezą.

a) posiewamy ezą inokulum pobrane z płynnej hodowli Escherichia coli do jednej probówki z

5 ml bulionu. ( z płynnej do płynnej )

b) posiewamy ezą inokulum pobrane ze stałej hodowli E. coli do drugiej probówki z 5 ml

bulionu. ( ze stałej do płynnej )

c) posiewamy ezą, rysą wężykowatą inokulum pobrane ze stałej hodowli E. coli na

powierzchnię skosu AO. ( ze stałej na skos )

d) posiewamy ezą z hodowli płynnej E. coli na płytkę z podłożem stałym AO w sposób

podany na rysunku. Osoby wskazane przez prowadzącego wykonują posiew z płynnej

hodowli Proteus sp . ( z płynnej na stałą )

●

2. Izolacja czystych hodowli bakterii metodą płytkową z zastosowaniem posiewu

redukcyjnego.

Każda osoba wysiewa na dwie płytki w sposób pokazany przez prowadzącego jedną z

poniższych płynnych, mieszanych zawiesin:

a) E.coli /Micrococcus luteus

2 płytki AO

b) E. coli / Salmonella enteritidis

1 płytka AO i 1 płytka MC

Ćwiczenie 2. Technika mikroskopowania - mikroskop świetlny zwykły.

Kształt, wielkość i ruch drobnoustrojów.

Barwienie Grama –złożone barwienie pozytywowe.

1. Obserwacja mieszanego preparatu drobnoustrojów eukariotycznych ( Saccharomyces

cerevisiae – drożdże piekarnicze) i prokariotycznych ( Escherichia coli ).

Sporządzamy mokry, przyżyciowy preparat z płynnej zawiesiny mieszanej obu hodowli

podbarwiony błękitem metylenowym; obserwacja z zastosowaniem obiektywu imersyjnego

( 100x ).

Wykonujemy rysunek spod mikroskopu zwracając uwagę na różnice w wielkości

komórek pro- i eukariotycznych.

2. Przygotowanie preparatów z dwóch z następujących mieszanych zawiesin płynnych:

Staphylococcus aureus + Escherichia coli

Bacillus mycoides + Salmonella enteritidis

Escherichia coli + Corynebacterium sp.

Micrococcus luteus + Escherichia coli

Bacillus sphaericus + Escherichia coli

Streptococcus sp. + Salmonella enteritidis

Oglądamy preparaty wykonane przez koleżanki i kolegów, po czym sporządzamy w zeszycie

i na tablicy tabelkę dzieląc obejrzane mikroorganizmy

na bakterie gram + i gram - .

Plik z chomika:

Inne pliki z tego folderu:

Inne foldery tego chomika: