Martyna Straszewska, Biotechnologia III r
Temat: Kinetyka reakcji enzymatycznych Km na przykładzie kwaśnej fosfatazy.
Kinetyka enzymatyczna to dział enzymologii,który zajmuje się badaniem szybkości reakcji enzymatycznej,a także wpływ różnych czynników.
Kwaśna fosfataza to enzym katalizujący reakcję odszczepiania reszty fosforanowej. Podczas hydrolizy p-nitrofenylofosforanu uwalnia się p-nitrofenol, który w środowisku alkalicznym ma barwę żółtą. Stała Km to zależność między stężeniem substratu a szybkością reakcji. Wartość stałej Km jest charakterystyczna dla każdego substratu. Odpowiada ona takiemu stężeniu substratu, przy którym szybkość reakcji osiąga połowę wartości szybkości maksymalnej.
Celem doświadczenia jest graficzne wyznaczenie stałej Michaelisa-Menten (Km) oraz szybkości reakcji V max metodą Lineweavera-Burka i metodą Eadie-Hofstee.
1. Krzywa kalibracyjna i obliczenie współczynnika kalibracji (K):
Stężenie [mmol/ml]
A1
A2
A śr
Stężenie [umol/0,5ml]
K
0,05
0,115
0,120
0,118
0,426
0,1
0,244
0,410
0,2
0,492
0,493
0,406
0,3
0,728
0,743
0,736
0,408
0,4
0,966
0,975
0,971
0,412
0,5
1,202
1,181
1,192
0,420
Średnia K :
0,414
2. Wykres zależności szybkości reakcji od stężenia substratu:
stężenie
Stężenie końcowe Mm]
Aśr
V
1/V
1/[S]
V/[S]
0,070
0,074
0,072
0,405
0,587
1,705
10,000
5,866
0,140
0,139
0,914
1,094
5,000
4,568
0,6
0,193
0,210
0,202
1,143
0,875
3,333
3,812
0,8
0,228
Rainhardt