Raport mikroby (1).doc

Raport z ćwiczenia I

Grupa II

Temat: Skrining środowiskowy.

1)     Wstęp teoretyczny

Skrining srodowiskowy jest to poszukiwanie mikroorganizmów (grzybów, promieniowców o znaczeniu biotechnologicznym). Obejmuje proces zabiegów mających na celu wykrycie i wyizolowanie spośród ogromnej liczby drobnoustrojów tych, które odpowiadają stawianym wymaganiom biotechnologicznym.

Przydatne biotechnologicznie mikroorganizmy powinny być:

-dostępne w postaci czystej kultury i łatwe do przechowywania przez dłuższy okres

czasu

-stabilne genetycznie i łatwo ulegać manipulacjom genetycznym

-proste w hodowli na dużą skale i na łatwo dostępnych podłożach przemysłowych

-mikroorganizm nie może być patogenny

Preparaty enzymatyczne należą do najlepiej rozwiniętego działu biotechnologii. Ich produkcja jest możliwa dzięki naturalnej zdolności mikroorganizmów do produkcji szerokiej gamy enzymów, np.  lipazy i proteazy.

Technologia produkcji preparatów enzymatycznych obejmuje m. in. wybór mikroorganizmu, przygotowanie hodowli, zaszczepienie podłoża produkcyjnego, biosyntezę enzymu, wydzielenie i zagęszczenie preparatu enzymatycznego.

2)     Materiały i metody

Selekcje szczepów bakteryjnych wykonano poprzez serie rozcieńczeń próbek pochodzących z różnych środowisk: woda, gleba, osad czynny, osad denny.

Z dwóch ostatnich rozcieńczeń danej próby wykonano wysiew tarty na pożywkę stałą. Pożywka do izolacji bakterii lipolitycznych zawierała trójbutrynę, a do izolacji bakterii proteolitycznych odtłuszczone mleko w proszku. Płytki z pożywkami inkubowano przez 7 dni w temperaturze 20°C. Następnie po upływie 7 dni zliczano kolonie bakterii oraz przenoszono 3 najbardziej aktywne szczepy lipolityczne i proteolityczne z każdego środowiska do pożywki płynnej. Próby inkubowano przez kolejne 7 dni w temperaturze 26°C.

Po upływie 7 dni oznaczano aktywność lipazy i aminopeptydazy w hodowlach. Użyto 2 substratów: MUF-butyrate do oznaczania lipazy i MCA-lecine do oznaczania aminopeptydazy.

Hodowle bakterii lipolitycznych i proteolitycznych poddano wirowaniu 10tys obrotów/min przez 10 minut w temperaturze 4°C aby oddzielić płyn pohodowlany zawierający dany enzym (lipazy lub aminopeptydazy) od biomasy komórek.

Następnie przygotowano mieszaninę reakcyjną w dwóch próbach dla każdego enzymu. W tym celu pobrano po 1ml płynu pohodowlanego i dodano do niego 0,125ml buforu fosforanowego i 0,125ml odpowiedniego substratu. Wykonano także próbę kontrolną nie zawierającą substratu.

Po wykonaniu prób mierzono ich aktywność.

1)     Wyniki:

Strefy przejaśnienia wokół bakterii są charakterystyczne dla drobnoustrojów proteolitycznych i lipolitycznych dzięki czemu łatwiej odróżnić je od pozostałych.

T-pożywka z trójbutryną, M-pożywka z odtłuszczonym mlekiem

X=a*R/v

a-średnia ze zliczonych bakterii

R-rozcieńczenie

v-objętość